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                    技術文章
                    了解一下去垢劑在蛋白提取中的應用吧
                      去垢劑亦有稱為清潔劑,主要成分是表面活性劑(部分場合即特指表面活性劑,可分陰離子、陽離子和中性去垢劑等多種類型,中性去垢劑在蛋白提取中應用的較多),根據實際需求有時也會包括研磨劑,pH調節劑,酸,硬水軟化劑,氧化劑,酶,發泡劑,增白劑、稀釋劑等多種成分。
                     
                      下面讓我們了解一下去垢劑在蛋白提取中的應用吧
                     
                      蛋白質變性劑的作用是破壞蛋白質的次級鍵,如氫鍵、鹽鍵和疏水力,引起天然構象的解體;它們并不破壞共價鍵,如肽鍵和二硫鍵,故不涉及一級結構的改變。
                     
                      變性劑有溶解型和沉淀型兩類,SDS、尿素和胍鹽是有效的溶解型變性劑,而甲醇、異戊醇是有效的沉淀變性劑。
                     
                      一般而言,變性劑應用時常大大過量,破壞氫鍵的變性劑用量至少兩倍于氨基酸的克分子數,如1克蛋白質可可結合1.4g。
                     
                      SDS溶于水可達25%,對溫度敏感,W/V貯存液為方便。需要注意的是SDS的鉀鹽是不溶性的,所以SDS溶液中要避免混入鉀鹽。
                     
                      尿素極易溶于水,可達10mol/L,在8mol/L以上要注意溫度以防止沉淀。尿素在水中緩慢分解形成氨及高度活性的氰酸離子,故要防止高溫。 過氯酸(TCA,PCA)都是*的沉淀劑,能沉淀蛋白質和核酸,前者應用更為廣泛。
                     
                      去垢劑作為添加劑生長蛋白質晶體是一項很有用的技術。非離子和兩性離子結晶劑在膜蛋白結晶中已經得到很好應用,目前已經變成常規的實驗手段。
                     
                      去垢劑在一些可溶蛋白中也起到了一定的作用,提高了晶體的質量和結果的可重復性 ,促進了單晶的生長, 但具體的影響機制尚不明確。其可能原因是去垢劑的引入使結晶液滴中的蛋白分子更具有親水性,使溶液中同質蛋白質分子增加。
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