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                    歡迎光臨上海懋康生物科技有限公司
                    主頁 > 產品中心 > 生化試劑 > 生物試劑 > MX4316-50ULLysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑
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                    LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑

                    LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑

                    簡要描述:

                    為滿足研究者研究活細胞內溶酶體生成和功能的動力學特征,特此開發Lysosensor探針,一種區分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針,由于質子化聚集在酸性細胞器上。這一質子化也使得因弱堿性側鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放,促使熒光信號增強。

                    產品時間:2024-03-21

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                     LysoSensor Yellow/Blue DND-160 /藍色溶酶體熒光探針      

                    產品信息

                    產品名稱

                    產品編號

                    規格

                    價格(元)

                    LysoSensor Yellow/Blue DND-160

                    MX4316-50UL

                    50µl

                    583

                    產品描述

                    為滿足研究者研究活細胞內溶酶體生成和功能的動力學特征,特此開發Lysosensor探針,一種區分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針,由于質子化聚集在酸性細胞器上。這一質子化使得因弱堿性側鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放,促使熒光信號增強。因此,LysoSensor探針遇酸后熒光信號呈現pH依賴性的增強。

                    LysoSensor Yellow/Blue DND-160(黃/藍色溶酶體探針)是一種獨*-特的比率型探針,呈現pH依賴性的雙激發和雙發射光譜峰(見Fig 1)。然而,活細胞中這一探針僅呈現pH依賴的雙發射光譜(發射波長比率~450/510 nm,激發波長~365 nm)。在酸性細胞器中,LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈現黃色熒光,而在酸性偏低的細胞器中具有藍色熒光。雙發射波長的測定允許比率成像分析在酸性細胞器比如:溶酶體或精子頂體內的pH。其pKa值約為4.2。LysoSensor Yellow/Blue DND-160,常常簡寫成PDMPO,普遍用作海洋硅藻中二氧化硅沉積和運輸的一種示蹤劑。

                    image.png

                    Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160pH依賴性光譜反應圖(A)熒光激發光譜(B)熒光發射光譜。

                    本品為DMSO儲存液,濃度為1mM。用于活細胞的溶酶體染色,建議工作濃度為1µM,需根據實際情況做優化調整。

                    產品特征

                    1) 外觀:溶液

                    2) 濃度:1mM in DMSO

                    3) 亞細胞定位:溶酶體

                    4) 顏色:黃色、藍色

                    5) 檢測儀器:熒光顯微鏡

                    6) Absnm329,384nm [最大雙吸收波長,對pH敏感,見Fig 1]

                    7) Emnm):440,540nm [最大雙發射波長,對pH敏感,見Fig 1]


                    保存與運輸方法

                    保存:-20oC避光干燥保存,收到貨至少12個月有效。

                    運輸:冰袋運輸。

                    注意事項

                    1) 整個染色過程中需注意避光。

                    2) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

                    使用方法

                    使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請將本品按單次用量分裝保存,-20°C避光干燥保存,盡量避免反復凍融。最佳工作濃度需根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優化。

                    1. 工作液的配制
                    利用生長培養基或合適的緩沖液將 1mM 儲存液稀釋至工作濃度,工作液需現配現用。對于 Lysosensor系列溶酶體探針,推薦工作液濃度1µM;
                    【注意】:

                    1)為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

                    2)若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育,會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現象。

                    2. 染色步驟(貼壁細胞)
                    1)將細胞置于培養皿中的蓋玻片上,加入合適培養基,使其爬片生長。
                    2)待細胞生長到合適密度,吸除培養液,加入適量 37℃預熱的含探針培養基(必須完*-全覆蓋住細胞),在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h(具體孵育時間需根據細胞類型而定)。
                    3)利用不含探針的新鮮培養基替換上述染色液,并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間,使得染料能聚集在溶酶體上。

                    3. 染色步驟(懸浮細胞)
                    1)離心沉淀細胞,吸除上清。
                    2)利用適量 37℃預熱的含探針培養基重懸細胞,在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h(具體孵育時間需根據細胞類型而定)。
                    3)離心,吸除染色液,加入新鮮培養基重懸細胞。
                    4用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間,使得染料能聚集在溶酶體上。
                    注意】:

                    另一種方法,懸浮細胞可能會粘附到 BD Cell-Tak 處理的蓋玻片上,此時,可用類似于貼壁細胞的方法進行染色。


                    附錄I 溶酶體探針總表

                    貨號

                    名稱

                    Abs (nm)[1]

                    Em(nm)[1]

                    pKa

                    MX4320-50UL

                    LysoTracker Blue DND-22 藍色

                    373

                    422

                    N/A

                    MX4318-50UL

                    LysoTracker Green DND-26 綠色

                    504

                    511

                    N/A

                    MX4317-50UL

                    LysoTracker Red DND-99 紅色

                    577

                    590

                    N/A

                    MX4319-50UL

                    LysoTracker Deep Red 遠紅

                    647

                    668

                    N/A

                    MX4316-50UL

                    LysoSensor Yellow/Blue DND-160 /藍色

                    329,384[2]

                    440,540[2]

                    4.2

                    MX4321-50UL

                    LysoSensor Green DND-189 綠色

                    443

                    505

                    5.2

                    [1]:在水溶性緩沖液或甲醇中測定的最大吸收和發射波長;在細胞環境內數值可能會有些許差異。

                    [2]:最大雙吸收和發射波長,對pH敏感。

                    溶酶體系列探針常見問題

                    1. 如何選擇合適的溶酶體探針?

                    答:對于溶酶體定位實驗,請選擇Lysotracker系列探針,根據自身的實驗體系,結合lysotracker系列探針的熒光特征,選擇合適激發和發射波長的熒光探針。Lysotracker Blue DND-22MX4320-50UL)探針的光量子產率偏低,建議在非熒光選擇受限的情況下,推薦選擇其他幾款Lysotracker探針。對于酸性細胞器(比如溶酶體)的pH測定實驗,請選擇Lysosensor系列探針。

                    2. 溶酶體探針染色后是否能做固定?

                    3. 溶酶體探針是否能用于流式分析和熒光光度計分析?

                    4. 溶酶體探針LysoTracker Green DND-26MX4318-50UL LysoSensor Yellow/Blue DND-160

                    MX4316-50UL)的建議孵育時間多少?

                    LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑

                    LysoSensor Yellow/Blue DND-160生化試劑

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